5.11 Juniperolide A

Raju 等^[11]从植物Juniperus excelsa 的根际分离出一株陆地放线菌（Lv1-48），并从中分离出一种新型线性聚酮类化合物Juniperolide A（5.21）。通过HPLC-DAD-MS 对小规模液体发酵产物进行分析，检测到Juniperolide A（m/z 709）。基于HRESIMS（+）分析，其分子式确定为C₃₉H₆₇NO₁₀，表明分子的不饱和度为7。紫外吸收光谱在240 nm 处的特征峰提示结构中可能存在二烯官能团。

为解析Juniperolide A 的结构，研究者结合了¹³C、¹H、HSQC、HMBC 和COSY 数据（表5.11）。NMR 光谱（在氘代甲醇中测定）显示了一个酰胺或酯羰基（δC 173.5）以及四个双键（δC 118.9–154.7）的信号，表明结构5.21 中包含两个环。基于光谱数据生成的分子连接图（MCD）展示于图5.20。

表5.11 Juniperolide A 的核磁共振波谱数据（溶剂：氘代甲醇）

MCD 概述分子骨架由50 个原子组成，其中包括39 个碳原子、10 个氧原子和1 个氮原子。其中，浅蓝色标记的碳原子存在杂化状态不确定性（sp²或sp³）。值得注意的是，碳原子C21 和C34（参见表5.11 及结构5.21）所连接的氢原子在¹H NMR 谱中表现为化学位移重叠信号（δH 2.08 ppm），从而导致其COSY 相关信号存在不确定性（以蓝色虚线标示）。然而，由于COSY 和HMBC 相关信号总数较多，表明该化合物的结构解析可在合理时间内完成。

检查MCD 时，程序提示“The minimum number of non-standard connectivities is 1”（非标准连接的最小数量为1），随后在“Determine Options Automatically”模式下启动了模糊结构生成（FSG）。结果如下：k = 19 →5 →5，生成时间（tg）为8 秒，生成过程中扩展了1 个连接（来自67 个相关信号），并充分利用了67 个可能的连接组合。为了便于分析生成的结果，图5.21 展示了排名输出文件中的前四个候选结构，并使用特定颜色标记了候选结构中每个碳原子的¹³C 化学位移预测准确性（参见第2.2.2 节）。

如下：偏差在±3 ppm 以内为绿色，3 至15 ppm 之间为黄色，大于15 ppm 为红色图5.21 显示，结构#1 和#2 的平均偏差和最大偏差值相近，且颜色标记分布高度相似。其中，结构#2 与文献^[11]中提出的Juniperolide A 结构（结构5.21）一致，在神经网络和增量法预测中表现更优；而结构#1 则在HOSE 码算法中排名第一。这一现象可归因于结构#1 和#2 互为互变异构体。图5.22 展示了这些结构的互变异构相关部分，并提供了相应的实验与计算¹³C 化学位移数据。

为预测¹³C 化学位移图5.22 的分析表明，碳原子C173.5 和C22.5 的化学位移预测结果与作者提出的Juniperolide A 结构高度一致^[11]，进一步验证了其结构合理性。相比之下，结构#3 和#4（见图5.21）由于含有酯基而非酰胺基团，其碳原子C35（结构#3）以及C35 和C2（结构#4）的化学位移与实验值存在显著偏差（均以红色标记），因此被排除在候选结构之外。附有¹³C化学位移归属信息的Juniperolide A 结构如图5.22 所示。

实心双箭头用于标识非标准的COSY 相关信号，不确定性相关信号则采用虚线表示。值得注意的是，尽管碳原子C 99.90 和C 101.1 的化学位移值提示可能存在C=C 双键结构，但通过进一步分析证实，这两个碳原子实际为sp³杂化，归属于缩酮基团而非双键结构。