4.9 Rubesanolide A

冬凌草（Isodon rubescens (Hemsl.) Hara）是中国传统医学中用于治疗呼吸道和胃肠道细菌感染、炎症及癌症的著名民间药物。Zou 等研究者[10]对该植物的化学成分进行研究，从中分离出两种新型二萜类化合物——Rubesanolides A（4.17）和B，其结构特征在于C9 和C20 之间形成了一个前所未有的β-内酯基团。

研究表明^[10]，化合物4.17 的构象与松香烷型二萜显著不同。在松香烷型二萜中，所有三个环（A、B 和C）均呈椅式构象；而在Rubesanolide A 中，这三个六元环分别呈现椅式、船式和扭曲椅式构象。A 环与B 环、B 环与C 环之间均为反式稠合，这是首次在二萜类化合物中发现此类骨架构象。

Rubesanolide A 以无色层状晶体（MeOH）形式分离。其正离子EIMS 显示[M]⁺峰位于m/z 334，对应分子式C₂₀H₃₀O₄，不饱和度为6。分子式进一步通过HRESIMS（[M+Na]⁺，实测值357.2035，计算值357.2041）以及¹³C 和DEPT NMR 谱图确证。红外光谱显示羟基（3,451 cm⁻¹）和羰基（1,804 cm⁻¹）的特征吸收带，其中1,804 cm⁻¹的吸收带是四元环内酯的典型特征^[11]。

文献^[10]中提供的¹H/¹³C NMR、HSQC 数据及关键HMBC/COSY 相关信号（以图示形式展示）详见表4.9。基于此构建的分子连接图（MCD）如图4.20 所示。

MCD 概述值得注意的是，若¹³C 化学位移出现在60-70 ppm 区间，通常认为相应sp³杂化碳原子最可能与氧原子相连^[11]。然而，在Rubesanolide A 分子中，对化学位移位于61.2-68.1 ppm 的所有碳原子采用这一假设将导致错误结论，因为C 61.2 仅与碳原子相连。因此，该假设无法得出正确结构。MCD 未进行人工编辑，也未利用¹H NMR 谱中的信号多重性（表4.9 中的M(J)列）加速结构生成。

MCD 检查未检测到二维核磁数据中的矛盾。启动严格结构生成程序，伴随¹³C 化学位移预测和结构过滤，运行结果为：k=60,991→4→3，tg=1 分24 秒。排名前三位的结果如图4.21所示。

可见，结构#1 与最初解析的结构4.17 完全一致，其自动归属的¹³C 化学位移如图4.18所示。

为进一步探究¹H NMR 谱中信号多重性对结构解析的影响，研究将相邻氢原子数添加到MCD 的原子属性中（表4.9 的M(J)列）。运行结果显示：k=5,366→3→2，tg=15 s，结构生成时间较之前缩短了五倍。生成的结构如图4.22 所示。

对比图4.21 与图4.22 可以发现，图4.21 中的结构#2 在第二次结构生成过程中被排除。通过分析其¹³C 化学位移归属( 如下图所示)，可明确其被淘汰的原因。

显然，与C 63.3 相连的质子（δH 2.73，单峰）的信号多重性与结构#2 中预测的三重峰存在矛盾。这一示例表明，利用¹H NMR 谱中五个信号（共二十二个）的多重性所携带的结构信息，可显著缩短结构生成时间。